点成方案丨点成生物PCR实验解决方案

PCR概述

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一种在体外模拟DNA复制过程，扩增少量的DNA片段，从而获得足够数量的DNA样本用于进一步研究的常见的分子生物学技术。该技术由美国的Kary Mullis在1983年发明，由于高度特异性和灵敏度，PCR被广泛应用于基础研究、疾病诊断、农业检测和法医鉴定等领域，而Kary Mullis也因这一发明获得了1993年的诺贝尔化学奖。

PCR技术主要包含3个反应步骤

01 变性

模板DNA在高温下（通常为93~94℃）变性，原来的DNA双链解离成单链；

02 退火

反应体系的温度降至50-65℃时，引物与单链互补结合；

03 延伸

在耐热的DNA聚合酶作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，合成新链；

PCR技术原理示意图

PCR分类

随着PCR技术的不断发展，在PCR技术原理的基础上衍生出了多样的PCR技术，目前常用的PCR技术主要包括以下几类：

常规PCR

最原始和简单的PCR方法，在PCR反应结束之后，通过凝胶电泳等方式分析PCR扩增终产物，此方法无法监测反应过程，只能在反应结束后借助电泳得到结果；

逆转录PCR

又称RT-PCR，这是一种从mRNA逆转录获得cDNA并扩增的技术。要进行逆转录PCR，需要先提取总RNA，以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，再以此cDNA为模板进行PCR扩增。逆转录PCR技术灵敏且应用广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

RT-PCR技术原理示意图

实时荧光定量PCR

又称qPCR或者Real-Time PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或荧光基团，通过收集荧光信号实时监测扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和Ct值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的方法包括荧光染料法和荧光探针法。

qPCR的荧光染料法和荧光探针法原理示意图

PCR常见问题

在进行PCR实验时，可能会遇见以下常见问题：

问题描述	可能原因	解决建议
扩展率低	模板完整性较差或纯度低；PCR循环数太少或延伸时间太短;变性时间过长；引物量不足；	优化DNA模板纯度；优化循环数和延伸时间；优化变性时间和温度；优化引物浓度；
有杂带	反应缓冲液未充分混匀；引物特异性差；外源DNA污染；	确保反应体系充分混匀；优化引物特异性;优化操作条件，确保洁净；
假阳性扩增	引物设计有问题;交叉污染；	检查引物序列；更换实验耗材，清洁工作台；

点成生物PCR试验解决方法

作为全国知名的实验室仪器集成商，点成生物始终致力于为客户提供先进的实验室设备解决方案。为帮助客户在PCR实验过程中保持洁净的操作环境，点成生物提供了一系列性能卓越的优质产品。如果您对点成生物的PCR实验解决方案感兴趣，欢迎您随时与我们联系。

洁净的操作环境

UVC/T-M-AR超净工作台

UVR-Mi空气净化器

充分的样品准备

点成生物C系列移液器

DC-MIX-V4500VT 迷你涡旋混匀器

高效的实验进程

MyGo系列实时定量PCR仪

MyGo系列实时定量PCR仪

CVP-2 PCR离心/涡旋混合一体机

DC-CNT-R44高速冷冻离心机

【关于点成】

点成生物与多家先进的国际仪器制造商（Grant、Nuve、Cellix、Microfluidic ChipShop、Beonchip、Drucker等）进行深度合作，专注于生命科学、温度控制、临床应用、微流控等领域；提供的产品有水浴、摇床、混匀器、离心机、移液枪、恒温振荡器、培养箱、蒸馏水机、程序降温仪、微流控芯片及分析系统等常用实验仪器；致力于生物科技领域产品和解决方案。

审核编辑黄宇